Mask creation

总结几个做mask的方法。

这里用一个ATPase作为例子,它分为可溶区头部和一个跨膜区,这里打算做一个跨膜区的mask做local refinement。

橡皮擦

这是最简单直接的方法,用Chimera或者ChimeraX打开map,然后用Tools > Eraser直接一点点擦就好了。

PDB to mask: ChimeraX

如果用ChimeraX,#1是map,#2是model。

先将pdb模型fit到对应位置,用molmap命令生成map。

molmap #1 30 onGrid #2

#1是pdb,#2是map,30是分辨率可以酌情调整。

然后保存新生成的#3 map,就可以在cryosparc里import volume了,记得type选择是mask,做一下柔化啥的,和之前的Local refinement教程里一样。

操作model比操作map简单多了 。甚至如果已经有局部的model了都不用删,可以快速对多个需要做local refinement的结构生成mask,这样就比橡皮擦快多了。

PDB to mask: Chimera

用Chimera软件的方法,一样先将model和map对应fit上。

根据这个model来生成map:

  • 重新显示map,然后在fit in map里点开option。
  • 勾上Real-time correlation / average update和Use map simulated from atoms, resolution。
  • resolution输入一个较低分辨率,比如这里给8。
  • Optimize选择correlation。
  • 然后点击Fit。这样就生成了一个粗略的mask了。

还需要让它边缘更加平滑一些。在Tools里选择Volume filter,将Width调到3,然后点击Filter。

注意此时mask是生成的,所以voxel size和原始的map不同,还需要让统一一下方便后续做refine。在command line输入并回车

vop resample #2 ongrid #0

其中#2是我们用Fit生成的那个map,#0是我们一开始打开的map。

可以看到#2的voxel size已经是480x480x480了(等于particle extraction的box size)。

然后保存map#2。

视频:

Map segment

这是贴在Local refine里的方法,也统一放在这页里。来自CryoSPARC,使用Segment方法分区,然后选区。

打开的Map。先用高斯滤波将Map平滑。平滑的mask很重要,没有低通滤波的mask包含高分辨率信息,后续的refinement可能会仅根据mask而不是volume本身在half map之间产生虚假的相关性,这会导致虚高的GSFSC,所谓的overfitting。

volume gaussian #1 sDev 2

然后使用Segger工具将volume分区。在ChimeraX中点击Tools - Volume Data - Segment Map。在弹出的框中选择刚刚生成的高斯滤波的volume,然后点击Segment。

map已经被分成了多个区域,现在需要做的是选中头部区域的块,操作详见ChimeraX使用。

Ctrl+Shift+鼠标左键可以连续选中区域,然后点击Group可以把多个区域合并成一个区域。点击Hide/Show/Delete就是对应的隐藏/显示/删除。差不多达到这个效果:

这样生成的volume的box size是不对的,我们需要把它调成和我们原始map相同。这里#4是要保存的mask,#1是最开始的map。

volume resample #4 ongrid #1

这样就会生成一个新的#5的map,保存它。

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